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    R5421 感受態細胞100ul*10?

    更新時間:2023-10-26

    簡要描述:

    R5421 感受態細胞100ul*10? 是采用大腸桿菌經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA 的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測,轉化效率可達108個轉化子/μg質粒DNA,-70℃保存3個月轉化效率可保持在90%以上。

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    R5421 感受態細胞100ul*10? 操作方法(以下操作均按無菌條件的標準進行)
    1 取感受態細胞置于冰浴中,如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中,置于冰浴中。
    ●  一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100 μl,可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA 體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。
    以下實驗以100 μl感受態細胞為例。
    R5421 感受態細胞100ul*10? 2 向感受態細胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態細胞能夠被1 ng 超螺旋質粒DNA 所飽和),輕輕旋轉離心管以混勻內容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
    3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉移到冰浴中,使細胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動離心管。
    4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養1 小時(160-220 轉/分鐘),目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達,使菌體復蘇。
    R5421 感受態細胞100ul*10? 5 將離心管內容物混勻,吸取100 μl 已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養12-16 小時。
    ●  涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA 總量較多,可取更少量轉化產物涂布平板;反之,如轉化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板)
     注意事項
    1. 感受態細胞應保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態細胞的轉化效率。
    2. 進行轉化操作時,應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。
    3 為防止轉化實驗不成功,可以保留部分連接反應液,以重新轉化,將損失降到低。
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